Cześć! Przygotujmy się razem do egzaminu. Dzisiaj skupimy się na Precision Plus Protein Standard Dual Color. Będzie super!
Co to jest?
Precision Plus Protein Standard Dual Color to wzorzec białkowy. Jest używany w elektroforezie żelowej.
Elektroforeza żelowa służy do rozdzielania białek. Robimy to na podstawie ich wielkości.
Wzorzec zawiera mieszaninę białek. Mają one znane masy cząsteczkowe.
Dlaczego go używamy?
Używamy go jako "linijki". Pomaga nam określić wielkość naszych białek.
Porównujemy nasz próbkę białek ze wzorcem. Wtedy wiemy, ile ważą.
Wzorzec jest "Dual Color". Oznacza to, że ma białka w dwóch kolorach. To ułatwia identyfikację.
Zastosowania
Sprawdzenie efektywności transferu białek na błonę. To bardzo ważne!
Określenie wielkości białek w Western blot. Typowa procedura.
Kontrola jakości elektroforezy. Upewniamy się, że wszystko działa poprawnie.
Skład wzorca
Wzorzec składa się z mieszaniny rekombinowanych białek.
Białka te zostały precyzyjnie oczyszczone. Ich masa cząsteczkowa jest dokładnie znana.
Niektóre białka są barwione na niebiesko. Inne na różowo (lub pomarańczowo/czerwono).
Typowy zakres mas cząsteczkowych to 10-250 kDa (kilodaltonów).
Jak go używać?
Rozmrażamy wzorzec przed użyciem. Upewnij się, że jest całkowicie rozmrożony.
Dodajemy odpowiednią objętość wzorca do dołka w żelu. Zazwyczaj to kilka mikrolitrów.
Przeprowadzamy elektroforezę zgodnie z protokołem. Pamiętaj o odpowiednim napięciu.
Po elektroforezie obserwujemy rozdzielenie białek. Widzimy kolorowe prążki.
Porównujemy położenie prążków próbki z prążkami wzorca. To pozwala nam oszacować wielkość białek.
Kroki po kroku
- Rozmrozić wzorzec.
- Dodać do dołka w żelu.
- Przeprowadzić elektroforezę.
- Obserwować prążki.
- Porównać z próbką.
Interpretacja wyników
Kolorowe prążki wzorca służą jako markery. Znajdują się w określonych miejscach.
Możemy stworzyć krzywą standardową. Używamy do tego masy cząsteczkowej białek wzorcowych.
Na osi X mamy masę cząsteczkową (kDa). Na osi Y mamy odległość, którą białko przebyło w żelu (migracja).
Dzięki krzywej standardowej możemy określić masę białka w naszej próbce.
Jeśli nasz białko migruje tak samo jak wzorzec o masie 50 kDa, to waży około 50 kDa.
Ważne wskazówki
Przechowywać wzorzec w odpowiedniej temperaturze. Zazwyczaj -20°C.
Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. To może zniszczyć białka.
Używać czystych pipet i naczyń. Unikamy zanieczyszczeń.
Zwracać uwagę na datę ważności. Stary wzorzec może dawać błędne wyniki.
Sprawdzić, czy wzorzec jest "ready-to-use". Niektóre wymagają rozcieńczenia.
Typowe problemy
Rozmazane prążki. Może być spowodowane złą jakością żelu.
Brak prążków. Może być spowodowane zbyt małą ilością wzorca.
Nierówne prążki. Może być spowodowane nierównomiernym polem elektrycznym.
Przesunięcie prążków. Może być spowodowane różnicami w składzie buforu.
Jak rozwiązywać problemy?
Sprawdzić jakość żelu. Upewnić się, że jest dobrze przygotowany.
Zwiększyć ilość wzorca. Spróbować dodać więcej.
Sprawdzić ustawienia elektroforezy. Upewnić się, że napięcie jest odpowiednie.
Przygotować świeży bufor. Stary bufor może stracić swoje właściwości.
Upewnić się, że próbki są odpowiednio przygotowane. Mogą zawierać substancje, które zakłócają elektroforezę.
Podsumowanie
Precision Plus Protein Standard Dual Color to wzorzec białkowy.
Służy do określania wielkości białek w elektroforezie żelowej.
Ma kolorowe prążki, które ułatwiają identyfikację.
Trzeba go przechowywać w odpowiedniej temperaturze.
Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania.
Interpretacja wyników polega na porównaniu prążków próbki z prążkami wzorca.
Powodzenia na egzaminie! Dasz radę!
